小鼠前白蛋白（TTR）ELISA试剂盒监测血浆中TTR蛋白的水平

口服给药的重要性与挑战

口服给药是医学中最广泛使用且便捷的给药途径，尤其适用于慢性病患者。然而，对于亲水性大分子药物（如核酸类药物），口服给药面临着肠道渗透性差和胃肠道（GI）降解等挑战。尽管肽类药物的口服给药形式已取得临床进展，但反义寡核苷酸（ASOs）和小干扰RNA（siRNAs）等核酸类药物的口服生物利用度仍较低。

siRNAs的潜力与挑战

siRNAs通过内源性的RNA干扰（RNAi）途径有效且安全地下调疾病相关mRNA，已成为治疗罕见病和常见病的新型药物类别。然而，siRNAs的大分子尺寸、高负电性和亲水性使其难以通过口服途径给药。尽管已有研究表明纳米颗粒介导的siRNA口服给药在动物模型中显示出治疗潜力，但纳米颗粒系统需要克服复杂的生物屏障以实现高效的口服递送。

GalNAc偶联的 siRNAs的优势

GalNAc（N-乙酰半乳糖胺）偶联的siRNAs通过靶向肝细胞表面的去唾液酸糖蛋白受体（ASGPR）实现高效递送。这种修饰显著提高了siRNAs的药代动力学/药效学（PK/PD）特性和安全性，是当前肝靶向RNAi药物的主流设计。因此，Alnylam制药公司的研究者在《Evaluating the oral delivery of GalNAc-conjugated siRNAs in rodents and non-human primates》中探索了GalNAc偶联的siRNAs通过口服途径给药的可能性。

实验方法

1. siRNAs的合成与修饰：研究中所用的GalNAc偶联的 siRNAs在MerMade合成仪上根据已发表的序列进行合成，并通过多种化学修饰提高其稳定性和靶向性。这些修饰包括2'-O-甲基化、2'-脱氧-2'-氟化、硫代磷酸酯连接等，以增强siRNAs的代谢稳定性和体内活性。

2. 口服给药制剂的开发：为提高siRNAs的肠道渗透性，研究者探索了多种渗透增强剂（PEs）。这些PEs包括中链脂肪酸（如C10、C8、C12等）、螯合剂（如EDTA、柠檬酸）和胆盐等。通过比较不同PEs对siRNA口服吸收的影响，最终选择C10作为进一步研究的渗透增强剂。C10因其已被FDA批准为食品添加剂，且在临床前和临床试验中广泛应用，具有良好的安全性和有效性。

3. 动物实验设计

小鼠实验：采用C57BL/6小鼠作为模型动物，通过口服灌胃给予GalNAc-conjugated siRNAs（与C10共配制）。监测血清中目标蛋白（如F12、TTR等）的水平变化，评估siRNA的敲低效果。同时，研究了不同PEs、剂量和给药次数对siRNA活性的影响。

非人灵长类动物（NHP）实验：选用食蟹猴作为模型动物，通过口服灌胃或皮下注射给予GalNAc-conjugated siRNAs。监测血浆和肝脏中siRNA的暴露水平及目标蛋白的敲低效果，同时评估药物的药代动力学特性。

4. ELISA试剂盒的应用：在动物实验中，使用了ALPCO品牌的小鼠前白蛋白（TTR）ELISA试剂盒（货号：41-PALMS-E01）来监测血浆中TTR蛋白的水平。该试剂盒具有高灵敏度、高特异性和操作简便等优点，能够准确测量血浆样本中TTR蛋白的浓度，从而评估siRNA的敲低效果。通过定期采集小鼠和食蟹猴的血浆样本，并使用该试剂盒进行检测，研究者能够实时监测目标蛋白的变化情况，从而评估siRNA的敲低效果和药代动力学特性。

实验结果

1. 小鼠实验中的siRNA活性

口服给予GalNAc-conjugated siRNAs（与C10共配制）后，小鼠血清中的目标蛋白水平显著下降，表明siRNAs通过口服途径被有效吸收并发挥作用。

不同PEs对siRNA口服吸收的影响各异，其中C10表现出最佳效果。通过比较不同PEs处理的动物组之间的目标蛋白水平变化，研究者发现C10能够显著提高siRNA的肠道渗透性。

剂量和给药次数的优化实验表明，多次小剂量给药可能优于单次大剂量给药。这可能是由于多次给药能够持续维持肠道内的PEs浓度，从而提高siRNA的渗透效率。

2. NHP实验中的siRNA活性与药代动力学

在NHP中，口服给予的GalNAc-conjugated siRNAs同样表现出显著的敲低效果。尽管生物利用度相对较低（约1.4-2.0%），但目标蛋白水平的变化趋势与皮下注射组相似，表明口服给药的siRNAs能够在体内发挥作用。

血浆和肝脏的药代动力学分析显示，口服给予的siRNAs迅速进入血液循环并主要分布于肝脏。这一结果与小鼠实验结果一致，进一步证实了GalNAc偶联技术在提高siRNA靶向性和渗透性方面的有效性。

3. ALPCO ELISA试剂盒的作用

高灵敏度与特异性：ALPCO的ELISA试剂盒能够准确测量血浆中TTR蛋白的微小变化，为评估siRNA的敲低效果提供了可靠的数据支持。

便捷性：该试剂盒操作简单、快速，适合大规模动物实验中的样本检测。

标准化：试剂盒遵循严格的质量控制标准，确保了实验数据的准确性和可重复性。

结论与讨论

本研究首次系统评价了GalNAc-conjugated siRNAs在啮齿类动物和非人灵长类动物中的口服给药效果。尽管口服给药的生物利用度相对较低，但研究结果表明通过优化PEs、剂量和给药次数等条件，GalNAc-conjugated siRNAs有望实现有效的口服递送。

1. 口服给药途径的潜力与挑战

口服给药作为一种理想的给药途径，具有患者依从性好、成本低廉等优点。然而，对于大分子药物如siRNAs而言，其肠道渗透性差和易降解的特性限制了口服给药的应用。本研究通过引入GalNAc偶联技术和渗透增强剂C10，显著提高了siRNAs的口服生物利用度，为siRNAs的口服给药提供了新的思路和方法。

2. ALPCO ELISA试剂盒的作用与价值

在本研究中，ALPCO品牌的小鼠前白蛋白ELISA试剂盒（货号：41-PALMS-E01）发挥了关键作用。该试剂盒具有高灵敏度、高特异性和操作简便等优点，能够准确测量血浆样本中TTR蛋白的浓度，为评估siRNA的敲低效果和药代动力学特性提供了可靠的数据支持。此外，该试剂盒还适用于大规模动物实验中的样本检测，提高了实验效率和准确性。

3. 未来研究方向

未来的研究将进一步探索提高siRNA口服生物利用度的方法。一方面可以开发新型渗透增强剂或载体系统以提高siRNA的肠道渗透性；另一方面可以优化制剂配方和给药策略以实现更高效的口服递送。同时随着基因编辑技术和合成生物学的发展，未来有望开发出更加稳定和高效的siRNA分子以适应口服给药的需求。这些努力将有助于推动siRNAs在临床治疗中的广泛应用并造福更多患者。